На главную
О введении в действие МУК МЗ и СЗ ПМР 4.2.577-12 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов»
Приказ
№ 675 от 13.12.2012
САЗ 13-7
- 1. Ввести в действие на территории Приднестровской Молдавской Республики методические указания МУК МЗ и СЗ ПМР 4.2.577-12 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов» (прилагаются).
- 2. Контроль за исполнением настоящего Приказа возложить на Главного врача ГУ «Республиканский центр гигиены и эпидемиологии» - Печул А.С.
- 3. Настоящий Приказ вступает в силу со дня официального опубликования.
- Раздел 1. Общие положения и область применения
- 1. Настоящие методические указания (далее - МУК) разработаны в соответствии с Законом Приднестровской Молдавской Республики от 3 июня 2008 года № 481-З-IV «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» (САЗ 08-22) с изменением и дополнениями, внесенными Законом Приднестровской Молдавской Республики от 6 августа 2009 года № 838-ЗИД- IV (САЗ 09-32), в целях дальнейшего совершенствования санитарно-эпидемиологического обеспечения населения Приднестровской Молдавской Республики.
- 2. Настоящие МУК предназначены для бактериологических лабораторий Государственной санитарно-эпидемиологической службы (далее - Госсанэпидслужба) Приднестровской Молдавской Республики.
- 3. Настоящие МУК устанавливают методы лабораторных исследований (испытаний) качества продуктов детского, лечебного питания и их компонентов по микробиологическим показателям безопасности для здоровья человека, проводимых в порядке производственного контроля, государственного санитарно-эпидемиологического надзора, а также при испытаниях указанной продукции в целях сертификации.
- 4. К продуктам детского и лечебного питания предъявляются более высокие микробиологические требования, чем к продуктам массового потребления, соответственно, и к пищевому сырью и компонентам, используемым для изготовления продуктов детского питания, установлены повышенные микробиологические требования.
- 5. Микробиологические требования к продуктам детского питания установлены в СанПиН МЗ и СЗ ПМР 2.3.2.1078-09 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов», утвержденных Приказом Министерства здравоохранения и социальной защиты Приднестровской Молдавской Республики от 29 июня 2009 года № 338 (регистрационный № 5070 от 30 ноября 2009 года) (САЗ 09-49).
- 6. Отбор проб проводят согласно ГОСТ 26809-86 «Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора проб и подготовка проб к анализу», утвержденному Приказом Министерства промышленности Приднестровской Молдавской Республики от 29 ноября 2002 года № 483 (регистрационный № 1892 от 5 декабря 2002 года) (САЗ 02-49); ГОСТ 13928-84 «Молоко и сливки заготовляемые. Правила приемки, методы отбора проб и подготовка их к анализу», утвержденному Приказом Министерства промышленности Приднестровской Молдавской Республики от 1 ноября 2002 года № 418 (регистрационный № 1836 от 1 ноября 2002 года) (САЗ 02-44); ГОСТ 9225-84 «Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа», утвержденному Приказом Министерства промышленности Приднестровской Молдавской Республики от 19 февраля 2003 года № 74 (регистрационный № 2032 от 4 марта 2003 года) (САЗ 03-10); ГОСТ 26668-85 «Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов», утвержденному Приказом Министерства промышленности Приднестровской Молдавской Республики от 29 ноября 2002 года № 483 (регистрационный № 1892 от 5 декабря 2002 года) (САЗ 02-49).
- 7. Посуду с пробой или пробу в потребительской таре, отправляемую в лабораторию вне организации-изготовителя, пломбируют или опечатывают и снабжают этикеткой, на которой указывают:
- 8. Микробиологические исследования продукта проводят не позднее чем через 4 часа с момента отбора проб.
- 9. Пробы должны храниться и транспортироваться до начала исследований при температуре продуктов не выше 6°С, не допуская подмораживания.
- 10. Отбор проб для микробиологических исследований производится специалистом Госсанэпидслужбы в присутствии должностного лица (представителя) организации-изготовителя.
- Раздел 3. Подготовка к анализу
- Глава 1. Подготовка проб к анализу
- 11. Молоко, сливки и другие жидкие продукты и компоненты.
- 12. Сгущенные продукты и компоненты.
- 13. Кисломолочные продукты и напитки, закваски.
- 14. Стерилизованные продукты детского питания.
- 15. Сыр, творог, творожные изделия и пастообразные продукты.
- 16. Топленое масло или молочный жир.
- 17. Сухие продукты детского питания и компоненты.
- Глава 2. Приготовление разведений продуктов для посева
- 18. Перед посевом готовят десятикратные разведения продукта в стерильных растворах фосфатного буфера, изотонического раствора натрия хлорида, пептонной воды или лимонно кислого натрия (для сыра). Для приготовления разведения готовят все необходимые стерильные материалы и посуду в соответствии со спецификой анализа исследуемого продукта: пробирки с 9 см3 или колбы с 90 см3 одного из растворов, используемых для приготовления разведений.
- 19. Из проб молока, сливок, кисломолочных продуктов и напитков, кукурузного масла, молочного жира и других жидких продуктов и компонентов отбирают стерильной пипеткой 10 см3 и вносят в 90 см3 одного из стерильных растворов, используемых для приготовления разведений, взбалтывают в течение четырех минут круговыми движениями до возможно более полного растворения. При этом пипетку промывают до 10 раз раствором этого продукта до верхнего уровня имеющихся на ней делений. Получают разведение 1:10 (первое разведение).
- 20. Приготовленные навески по 10 г сухих молочных продуктов детского питания, сывороточных белковых концентратов, казецитов и других компонентов, сгущенных продуктов, сыра, творога, творожных изделий и других пастообразных продуктов переносят в колбу с 90 см3 одного из стерильных растворов, используемых для приготовления разведений, подогретых от 40°С до 45°С и взбалтывают от 4 до 5 минут круговыми движениями до возможно более полного эмульгирования. Получают разведение 1:10. При другом способе разведения к приготовленным навескам по 10 г вышеуказанных продуктов добавляют 90 см3 одного из стерильных растворов, подогретых от 40°С до 45°С.
- 21. Для получения однородной взвеси продукта допускается перемешивание на аппарате для встряхивания жидкостей в течение 6 минут, избегая намокания пробок. Первое разведение продукта (1:10) можно гомогенизировать в стерильном стакане гомогенизатора или растереть в стерильной ступке.
- 22. Из первого разведения продукта стерильной пипеткой берут 1,0 см3 и переносят в пробирку, содержавшую 9,0 см3 стерильного раствора, используемого для приготовления разведений, перемешивают осторожно, набирая и выдувая из пипетки от 5 до 10 раз. Получают второе разведение продукта (1:100). Последующие разведения в зависимости от предполагаемого обсеменения продукта 1:1000, 1:10000 и так далее готовят аналогично.
- 23. Для приготовления разведений сухих молочных каш для детского питания используют надосадочную жидкость первого разведения продукта после отстаивания его в течение 3 минут.
- Глава 3. Подготовка посуды и материалов
- 24. Всю новую посуду, предназначенную для бактериологических работ, кипятят в подкисленной воде (2 %-ном растворе соляной кислоты) от 15 до 20 минут и затем ополаскивают дистиллированной водой.
- 25. Лабораторную посуду перед использованием обязательно стерилизуют. Перед стерилизацией пипетки завертывают в плотную оберточную бумагу или кладут в пеналах. В верхнюю часть пипетки предварительно вкладывают кусочек ваты. Стерилизацию осуществляют в сухожаровом шкафу при температуре (180±5) °С в течение 1 часа.
- Раздел 4. Методы анализа
- Глава 4. Определение общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов
- Глава 5. Определение бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
- 33. Сущность метода.
- 34. Подготовку проб и приготовление разведений осуществляют в порядке, установленном в разделе 3 настоящих МУК.
- 35. Посев с предварительной инкубацией детских сухих молочных продуктов. Асептически взвешивают 1 г сухого продукта, вносят в колбочку или пробирку с 9 см3 разбавленного фосфатного буфера для предварительного обогащения. Взвесь тщательно перемешивают, проверяют значение pH при помощи индикаторной бумаги (стерильной стеклянной палочкой наносят каплю испытуемой взвеси на полоску универсальной индикаторной бумаги и полученную окраску немедленно сравнивают со шкалой). При необходимости доводят активную кислотность до pH 7,0, используя стерильные растворы 1 моль/дм3 гидроокиси натрия или 1 моль/дм3 соляной кислоты.
- 36. Прямой посев производится в среду Кесслер с лактозой (с поплавками), с соблюдением соотношения продукта и среды 1:10.
- 37. Учет результатов.
- Глава 6. Определение E.соli
- 38. E.coli - не утилизирующие цитрат грамотрицательные бесспоровые палочки, входящие в группу колиформных бактерий и являющиеся индикатором относительно свежего фекального загрязнения, способные расти и ферментировать лактозу при температурах выше температуры тела человека и теплокровных животных (от 44 до 45°С).
- 39. Сущность метода.
- 40. Подготовку проб и приготовление разведений осуществляют в порядке, установленном в разделе 3 настоящих МУК.
- 41. Проведение анализа с предварительной инкубацией.
- 42. Проведение анализа без предварительной инкубации.
- 43. Реакция на индол.
- 44. Реакция Фогес-Проскауэра.
- 45. Реакция с метиловым красным.
- 46. Утилизация цитратов.
- 47. Оценка результатов идентификации осуществляется согласно Таблице № 1 настоящих МУК.
- Глава 7. Определение сальмонелл
- 48. Сальмонеллы - обширный род семейства энтеробактерий, включающий более 2000 серотипов, большинство которых обладает патогенными свойствами. К сальмонеллам относятся аэробные и факультативно-анаэробные грамотрицательные подвижные палочки, хорошо растущие на обычных питательных средах и разнообразных пищевых субстратах.
- 49. Сущность метода.
- 50. Подготовку проб и приготовление разведений осуществляют в порядке, установленном в разделе 3 настоящих МУК.
- 51. Проведение анализа.
- 52. Посев с предварительной инкубацией.
- 53. Прямой посев в среды для селективного обогащения.
- 54. После инкубации в термостате производят высев из колб и пробирок с магниевой или селенитовой средой на поверхность подсушенных чашек с плотными средами: Эндо, Плоскирева и висмут - сульфитного агара. Для получения отдельных колоний петлей берут минимальное количество посевного материала и производят посев штрихом. Чашки с посевами помещают в термостат при температуре (37±1) °С от 24 до 48 часов. Проверку посевов осуществляют дважды: через 24 и 48 часов.
- 55. Обработка результатов.
- 56. Подозрительные колонии на сальмонеллы высевают штрихом и уколом на трехсахарный агар с мочевиной или среду Клиглера. Пробирки с посевами выдерживают в термостате при температуре (37±1) °С в течение 24 часа. Производят идентификацию культур по ферментации лактозы, глюкозы, сахарозы и расщеплению мочевины.
- 57. Механизм действия среды Клиглера идентичен с трехсахарным агаром. Об образовании сероводорода судят по почернению среды в столбике. Если культуры сбраживают лактозу с образованием газа и расщепляют мочевину, они не принадлежат к бактериям рода сальмонелла.
- 58. Бактерии рода Salmonella не образуют ацетилметилкарбинола (реакция Фогес - Проскауэра отрицательная).
- 59. Если обе пробирки покажут типичную для сальмонелл окраску сред, а выделенный штамм дает отрицательную реакцию Фогес-Проскауэра, проводят серологическое исследование. Для этой цели берут петлей небольшое количество культуры из пробирок с трехсахарным агаром или средой Клиглера, эмульгируют в капле физиологического раствора на предметном стекле. Добавляют каплю поливалентной сальмонеллезной 0- сыворотки к раствору и осторожно покачивают предметное стекло, чтобы смешать жидкости.
- 60. При выделении культур грамотрицательных палочек, ферментирующих глюкозу с образованием или без образования газа, не ферментирующих лактозу и сахарозу, образующих или не образующих сероводород, дающих отрицательную реакцию Фогес - Проскауэра и обладающих четкой серологической характеристикой, считается, что в исследуемой навеске продукта присутствуют бактерии рода сальмонелла.
- Глава 8. Определение коагулазоположительных стафилококков (S.aureus)
- 61. Коагулазоположительный стафилококк (далее - S.aureus) - факультативно-анаэробные грамположительные сферические пигментообразующие микроорганизмы, обладающие коагулазной и лецитиназной активностью, большая часть из которых способна продуцировать энтеротоксины.
- 62. Сущность метода.
- 63. Подготовку проб и приготовление разведений осуществляют в порядке, установленном в разделе 3 настоящих МУК.
- 64. Проведение анализа.
- 65. Взвешивают в стерильных условиях 10 г или 1 г продукта и помещают в колбы с 90 см3 или 9 см3 разбавленного фосфатного буфера. Хорошо размешивают. Смесь выдерживают в термостате при температуре (37±1) °С от 18 до 24 часов. На следующий день пипеткой переносят 1,0 см3 смеси в пробирку с солевым бульоном и помещают в термостат при температуре (37±1) °С на 24 часа.
- 66. Через 24 часа производят пересев петлей из бульона для получения изолированных колоний на чашки Петри с подсушенной средой желточно - солевого агара (далее - ЖСА). Чашки с посевами выдерживают в термостате при температуре (37±1)°С от 24 до 48 часов. На ЖСА колонии стафилококков имеют форму выпуклых дисков диаметром от 2 до 4 мм, белого, желтого, кремового, лимонного, золотистого цвета с ровными краями, вокруг колоний образуется радужное кольцо и зона помутнения среды.
- 67. Постановка реакции плазмокоагуляции.
- 68. Обработка результатов:
- Глава 9. Определение B.cereus
- 69. Определение B.cereus проводят согласно ГОСТ 10444.8-88 «Продукты пищевые. Метод определения Bacilluc cereus», утвержденному Приказом Министерства промышленности Приднестровской Молдавской Республики от 8 октября 2002 года № 404 (регистрационный № 1823 от 22 октября 2002 года) (САЗ 02 - 43).
- 70. Сущность метода.
- 71. Проведение анализа.
- 72. Посев производят по 0,1 см3 из разведения сухих молочных продуктов 1:10 (0,01 г продута) и по 0,2 см3 БАД из разведения 1:10 (0,02 г продукта) на поверхность хорошо подсушенной питательной среды в двух чашках Петри. Посевной материал тщательно растирают шпателем.
- 73. Обработка результатов.
- 74. Идентификация культур.
- 75. При обнаружении роста, для определения количества B.cereus в исследуемом продукте, количество выросших типичных колоний на чашках умножают на соответствующее разведение и выражают в пересчете на 1 г или 1,0 см3 исследуемого продукта.
- 76. В продуктах, выработанных с соблюдением технологических правил, при посеве 0,01 г рост B.cereus должен отсутствовать, что соответствует показателю на этот микроорганизм - «менее 100 КОЕ/г».
- Глава 10. Определение количества дрожжей и плесневых грибов
- 77. Сущность метода.
- 78. Подготовку проб и приготовление разведений осуществляют в порядке, установленном в разделе 3 настоящих МУК.
- 79. Посев: для определения количества дрожжей и плесневых грибов из каждой пробы делают посев по 1,0 см3 исходного продукта или по 1,0 см3 разведений 1:10 и 1:100 на две чашки Петри. В каждую чашку Петри, с заранее промаркированной крышкой, добавляют не позднее чем через 15 - 20 минут 14 см3 одной из агаризированных сред, охлажденной до 45°С. Среду немедленно тщательно перемешивают и оставляют для застывания.
- 80. Результаты микроскопировании оценивают, пользуясь характеристикой дрожжей и плесневых грибов, указанной в Таблице № 2:
- 81. Обработка результатов.
- 82. При обнаружении в 1 г исследуемого продукта количество дрожжевых и плесневых грибов, превышающих установленные нормативы по этим показателям, партия готового продукта к реализации задерживается для повторного расширенного микробиологического контроля. Отбирают удвоенное количество образцов готовых детских сухих молочных смесей с проведением посева на все микробиологические показатели. Одновременно производят внеочередной контроль (на содержание дрожжевых и плесневых грибов) по ходу технологического процесса.
- Глава 11. Определение ацидофильных бактерий
- 83. Сущность метода.
- 84. Подготовку проб и приготовление разведений осуществляют в порядке, установленном в разделе 3 настоящих МУК.
- 85. Проведение исследований.
- 86. Инкубация: посевы выдерживают в термостате при температуре (38±1) °С от 3 до 5 дней. В течение этого времени во всех пробирках, в которых содержатся ацидофильные бактерии, молоко должно свернуться. Из трех последних разведений со свернувшимся обезжиренным молоком готовят микроскопические препараты.
- 87. Обработка результатов проводится согласно Таблице № 3:
- 88. Определение количества ацидофильных палочек на твердой питательной среде:
- Глава 12. Определение количества бифидобактерий
- 89. Сущность метода.
- 90. Подготовку проб и приготовление разведений осуществляют в порядке, установленном в разделе 3 настоящих МУК, с условием обязательной предварительной регенерации (прогревание) буферного раствора, применяемого для разведения продукта, в кипящей водяной бане при 100°С в течение 20 минут с последующим охлаждением до температуры (45±2) °С.
- 91. Проведение исследований:
- 92. Инкубация.
- 93. Обработка результатов.
- Глава 13. Метод микроскопирования
- Глава 14. Метод определения промышленной стерильности молока и сливок
- Раздел 5. Общие требования к проведению микробиологического контроля
- 100. В продуктах детского питания и компонентах нормируются общее количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, плесневые грибы, дрожжи и B.cereus в 1 г продукта и их содержание выражается количеством колониеобразующих единиц - КОЕ/г. Другие группы микроорганизмов - бактерии группы кишечных палочек (колиформы), E.coli, коагулазоположительные стафилококки (S.aureus), патогенные микроорганизмы, в том числе сальмонеллы, не допускаются в определенной массе продукта.
- 101. В последние годы во всех развитых странах мира созданы организации молочной промышленности и цехи многопрофильного плана. В этих организациях (цехах), оснащенных современным высокопроизводительным оборудованием и автоматизированными линиями, допускается изготовление продуктов питания для детей различных возрастных групп и взрослых: адаптированные смеси, продукты прикорма на молочной и безмолочной основах со злаковыми, овощными и фруктовыми наполнителями, различные виды каш, пудингов, десертов, соков, кисломолочных и пастообразных продуктов.
- 102. При инспекционном контроле готовых детских молочных продуктов лаборатории Госсанэпидслужбы осуществляют исследования на все виды микроорганизмов. В том случае, если один или несколько показателей превышают нормы, производится микробиологический контроль ингредиентов.
- 103. Контроль поступающего сырья, компонентов, продуктов детского питания, а также контроль технологических процессов и санитарно-гигиенических условий производства должен осуществляться лабораториями предприятий в соответствии с настоящими Методическими указаниями и с действующими инструкциями по микробиологическому контролю на молочно-консервных комбинатах детских продуктов.
- Раздел 6. Материалы, реактивы и питательные среды
- Глава 15. Питательные среды и реактивы общего назначения
- 105. Концентрированный фосфатный буферный раствор: взвешивают 34 г однозамещенного фосфорнокислого калия и растворяют в 500 см3 дистиллированной воды в мерной колбе. Устанавливают pH 7,2 раствором гидроокиси натрия 1 моль/ дм3 и доводят дистиллированной водой до 1000 см3. Хранят в емкости, укупоренной резиновой пробкой, в условиях холодильника не более 30 суток.
- 106. Разбавленный фосфатный буферный раствор: вносят пипеткой 1,25 см3 концентрированного фосфатного буферного раствора в мерную колбу, вместимостью 1000 см3, и доводят объем дистиллированной водой до метки, проверяют активную кислотность pH 7,1.
- 107. Пептонная вода (0,1 %-ный водный раствор пептона): к 1,0 дм3 дистиллированной воды добавляют 1 г пептона. После размешивания среду кипятят, фильтруют и разливают в пробирки и флаконы в необходимых количествах. Стерилизует при температуре (121±1) °С в течение 30 минут.
- 108. Изотонический 0,85 %-ный раствор хлористого натрия. Для приготовления изотонического раствора, активной кислотностью pH 7,0 используют дистиллированную воду, pH которой проверяют индикатором бромтимолблау. При его добавлении цвет воды должен быть бутылочно-зеленым. В иных случаях воду не используют. В 1,0 дм3 воды растворяют 8,5 г хлористого натрия, разливают раствор в чистые пробирки (диаметром 18 - 20 мм) по 10 см3, а в колбы - по 93 см3 и стерилизуют в течение 15 минут при температуре (121±1) °С.
- 109. Приготовление раствора лимоннокислого натрия для приготовления разведений сыра. В 1000 см3 дистиллированной воды растворяют 20 г трехзамещенного лимоннокислого натрия, разливают в пробирки по 10 см3 и колбы по 93 см3 и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 минут.
- 110. Стерильная дистиллированная вода. Дистиллированную воду разливают в колбы или пробирки в необходимых количествах и стерилизуют в течение 20 минут при температуре (121±1) °С.
- 111. Раствор двууглекислого натрия для нейтрализации проб кисломолочных продуктов и закваски: 10 г двууглекислого натрия помещают в мерную колбу, вместимостью 100 см3, растворяют дистиллированной водой, доводят объем раствора до метки. Раствор разливают в пробирки и стерилизуют в течение 30 минут при температуре (121±1)° С.
- Глава 16. Реактивы для окраски по Граму (модификация Г.П. Калины)
- 112. Приготовление реактивов из метиленового голубого:
- 113. Приготовление карболового раствора кристаллического фиолетового для окраски препаратов: 1 г красителя кристаллического фиолетового растирают в ступке с 2 г кристаллической карболовой кислоты до кашицы, прибавляют небольшими порциями 10 см3 96 %-ного этилового спирта. Доводят объем до 100 см3 дистиллированной водой. Таким образом, получают основной раствор. Для приготовления рабочего раствора к 10 см3 основного карболового раствора кристаллического фиолетового добавляют 90 см3 дистиллированной воды. Тщательно перемешивают. Растворы хранят в темном флаконе под притертой пробкой.
- 114. Мясопептонный бульон: говяжье мясо, освобожденное от жира и сухожилий, пропускают через мясорубку. Взвешивают фарш, складывают его в кастрюлю и смешивают с двойным количеством водопроводной воды. Затем оставляют на 24 часа при температуре (5±1) °С. Для ускорения процесса выделения питательных веществ из мяса содержимое кастрюли подогревают при температуре от 50°С до 55°С в течение 1 часа и затем кипятят от 35 до 45 минут. После кипячения бульон в горячем состоянии фильтруют через двойной бумажный фильтр. Фильтрат доводят питьевой водой до первоначального объема, добавляют к нему 1,0 % пептона и 0,5 % хлористого натрия. Устанавливают с помощью раствора гидроокиси натрия 1 моль/ дм3 активную кислотность pH 7,3 -7,4. Приготовленный бульон разливают в колбы и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 минут.
- 115. Мясопептонный агар: к 1,0 дм3 мясопептонного бульона или перевара Хоттингера, с концентрацией аминного азота не менее 100 мг/дм3 добавляют 15 г мелко нарезанного агара в волокнах или порошке. После 15 - минутного набухания агар-агара смесь кипятят при постоянном помешивании до полного его растворения. Полученную среду после установления активной кислотности pH 7,3 - 7,4 фильтруют в горячем виде через ватно-марлевый фильтр, разливают во флаконы и пробирки и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 минут.
- Глава 17. Специальные питательные среды и реактивы
- 116. Среды для определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов:
- 117. Приготовление сред и реактивов для обнаружения бактерий группы кишечных палочек и эшерихий коли согласно пунктам 119 - 134 настоящих МУК.
- 118. Среда Кесслера (с лактозой): к 1,0 дм3 водопроводной воды добавляют 10 г пептона и 50 см3 стерильной желчи крупного рогатого скота. Смесь кипятят на водяной бане при помешивании от 20 до 30 минут. Затем фильтруют ее через ватно-марлевый фильтр, добавляют 2,5 г лактозы; доводят объем водой до 1 дм3. Устанавливают pH 7,5, используя растворы гидроокиси натрия или соляной кислоты 1 моль/ дм3 и проверяя значение pH на потенциометре. Добавляют 4,0 см3 1 %-ного водного раствора кристаллического фиолетового, разливают в пробирки по 10 см3 или колбочки по 50 см3, закладывают поплавки. Стерилизуют в течение 15 минут при температуре (121±1) °С.
- 119. Среды сухие Левина и Эндо промышленного выпуска готовят согласно прописи, указанной на этикетке банок. Изготовленные и разлитые в стерильные чашки Петри среды можно хранить при температуре (4±2) °С до 10 суток.
- 120. Среда на индол: 10 г сухого панкреатического гидролизата казеина (или 100 см3 жидкого панкреатического гидролизата казеина), 5 г хлористого натрия, 1,0 г DL- триптофана растворяют в 1,0 дм3 дистиллированной воды. Доводят pH 7,0 растворами гидроокиси натрия или соляной кислоты 1 моль/ дм3 и, измеряя значение pH на потенциометре, разливают в пробирки по 5,0 см3, стерилизуют в течение 15 минут при температуре (121±1) °С.
- 121. Среда Кларка: взвешивают 5 г пептона, 5 г глюкозы, 5 г двузамещенного фосфорнокислого калия. Растворяют ингредиенты в 950 см3 дистиллированной воды, устанавливают pH 6,9, используя растворы гидроокиси натрия или соляной кислоты 1 моль/дм3. Проверяют pH на потенциометре. Доводят общий объем до 1000 см3 дистиллированной водой и при необходимости фильтруют. Разливают в пробирки по 5 см3, стерилизуют в течение 20 минут при температуре (115±1) °С.
- 122. 90 %-ный раствор этилового спирта. В колбу, емкостью 1000 см3, с 900 см3 96 %-ного этилового спирта добавляют 60 см3 дистиллированной воды.
- 123. Раствор индикатора метилового красного: 0,1 г индикатора метилового красного помещают в мерную колбу, вместимостью 500 см3, растворяют в 300 см3 90 %-ного раствора этилового спирта, доливают до 500 см3 дистиллированной водой. Хранят раствор в колбе с притертой пробкой при температуре (4±2) °С.
- 124. 0,5 %-ный раствор бромтимолового синего в спирте: взвешивают 0,5 г бромтимолового синего, помещают в мерную колбу, вместимостью 100 см3, и доводят этиловым спиртом до метки. Раствор хранят при температуре (4±2) °С до 35 суток в колбе с притертой пробкой.
- 125. 0,5 %-ный и 0,1 %-ный растворы бриллиантового зеленого: для приготовления 0,5 %-ного раствора асептически взвешивают 0,5 г индикатора бриллиантового зеленого, вносят в стерильную мерную колбу, вместимостью 100 см3, и доводят стерильной дистиллированной водой до метки. Для приготовления 0,1 %-ного раствора в стерильный мерный цилиндр или колбу к 10 см3 исходного 0,5 %-ного раствора индикатора добавляют 40 см3 стерильной дистиллированной воды. Растворы хранят в холодильнике до 10 суток.
- 126. 1,6 %-ный раствор бромкрезолового пурпурного в спирте: взвешивают 1,6 г индикатора бромкрезолового пурпурного и переносят в мерную колбу, вместимостью 100 см3. Доводят 96 %-ным этиловым спиртом до метки. При необходимости фильтруют через бумажный фильтр. Хранят в колбе со шлифом в условиях холодильника.
- 127. 5 %-ный раствор a-нафтола: взвешивают 5 г a-нафтола, растворяют в 100 см3 96 %-ного этилового спирта. Раствор готовят непосредственно перед применением.
- 128. 40 %-ный раствор гидроокиси калия: в стакане, вместимостью 100 см3 взвешивают 40 г гидроокиси калия, переносят в мерную колбу, вместимостью 100 см3, растворяют в 60 см3 дистиллированной воды, затем доводят до метки дистиллированной водой. Раствор хранят при температуре от 4°С до 6°С.
- 129. 1 %-ный водный раствор генцианового (кристаллического) фиолетового: взвешивают 1 г генцианового (кристаллического) фиолетового, помещают в мерную колбу, вместимостью 100 см3, и доводят до метки дистиллированной водой. Раствор хранят при температуре от 4°С до 6°С в течение 7 суток.
- 130. Реактив на индол (Эрлиха): взвешивают 5 г пара - диметиламинобензальдегида в стеклянном стакане, вместимостью 100 см3, помещают в коническую колбу, вместимостью 200 см3, и растворяют в 50 см3 этилового спирта. С помощью мерного цилиндра, вместимостью 100 см3, медленно добавляют 50 см3 концентрированной соляной кислоты. Раствор хранят в колбе с притертой пробкой при температуре от 4°С до 6 °С.
- 131. Среда Козера: взвешивают 1,5 г натрия-аммония фосфорнокислого, 1 г калия фосфорнокислого двузамещенного, 0,2 г магния сульфата, 3 г натрия лимоннокислого трехзамещенного. Растворяют в 950 см3 дистиллированной воды, добавляют 10 см3 0,5 %- ного спиртового раствора бромтимолового синего. Устанавливают pH 6,8 растворами гидроокиси натрия или соляной кислоты, проверяя значение pH на потенциометре. Доводят объем дистиллированной водой до 1,0 дм3. Разливают по 10 см3 в пробирки, стерилизуют в течение 15 минут при температуре (121±1) °С.
- 132. Среда Симмонса: среду готовят аналогично среде Козера, но после измерения pH в нее добавляют 2 г агар-агара на 1000 см3, прогревают на водяной бане до расплавления агара, стерилизуют течение 15 минут при температуре (121±1) °С. Разливают в стерильные чашки Петри или пробирки.
- 133. Среда с 5 % сахарозы: в 1000 см3 дистиллированной воды растворяют 30 г сухого питательного агара и 50 г сахарозы. Стерилизуют в течение 30 минут при температуре (112±1) °С.
- 134. Среды и реактивы для обнаружения бактерий рода Salmonella готовят в соответствии с пунктами 136 - 144 настоящих МУК.
- 135. Магниевую среду готовят из трех растворов:
- 136. Дрожжевой диализат: взвешивают 1000 г свежих хлебных (прессованных) дрожжей, размешивают в 1000 см3 дистиллированной воды в кастрюле до состояния гомогенной массы, которую переливают в целлофановый мешок, предварительно промытый дистиллированной водой. Мешок завязывают, обмывают под струей питьевой воды, а затем дистиллированной водой и погружают в эмалированную посуду, в которую предварительно наливают 1300 см 3 дистиллированной воды. Мешок должен быть полностью погружен в жидкость. Диализ ведут при температуре от 60°С до 80°С в течение 6 часов. За это время количество жидкости в кастрюле должно уменьшиться примерно в 2 раза. Затем жидкость из кастрюли переливают в стерильную бутыль и добавляют хлороформ (0,5 % к общему объему жидкости) и сохраняют при температуре от 5°С до 7°С до 7 месяцев.
- 137. Среда Мюллера: к 90 см3 стерильного мясопептонного бульона добавляют: 4,5 г химически чистого мела (CaCO3), предварительно простерилизованного во флаконе сухим жаром (при 160°С в течение двух часов); 10 см3 раствора гипосульфита натрия (50 г чистого кристаллического гипосульфита натрия в мерной колбе доводят до 100 см3 дистиллированной водой, стерилизуют текучим паром в течение 30 минут); 2 см3 раствора Люголя (металлического йода - 25 г, йодистого калия - 20 г, дистиллированной воды - 100 см3).
- 138. Среда Кауфмана: к 100 см3 среды Мюллера добавляют 0,2 см3 0,5 %-ного водного раствора бриллиантового зеленого и 5 см3 стерильной желчи крупного рогатого скота. Приготовленную смесь стерилизуют текучим паром в течение 30 минут. До стерилизации среда зеленого цвета, после стерилизации она приобретает зеленовато-коричневый тон.
- 139. Селенитовая среда накопления Лейфсона:
- 140. Среды Плоскирева и висмут-сульфитный агар (далее - ВСА) промышленного производства выпускаются в сухом виде. Их следует готовить согласно прописи, указанной на этикетке банки. Изготовленные и разлитые в стерильные чашки Петри среды можно хранить и холодильнике до 10 суток.
- 141. Трехсахарный агар с мочевиной (среда Олькеницкого): трехсахарный агар с мочевиной готовят смешением следующих ингредиентов:
- 142. 0,4 %-ный водный раствор фенолового красного: взвешивают 0,1 г индикатора фенолового красного, вносят в колбу, вместимостью 50 см3, и вливают 25 см3 дистиллированной воды. Тщательно перемешивают до полного растворения. Раствор хранят в холодильнике до 7 суток. Для получения 0,04 %-ного рабочего раствора индикатора 1,0 см3 0,4 %-ного раствора смешивают с 9 см3 дистиллированной воды.
- 143. Среда Клиглера из сухих питательных сред: среду готовят и стерилизуют согласно прописи на этикетке. Готовую среду скашивают в пробирках так, чтобы остался небольшой столбик (не менее 3 см высотой).
- 144. Среды и реактивы для обнаружения стафилококков:
- 145. Среды и реактивы для обнаружения B.cereus:
- 146. Среды и реактивы для обнаружения плесневых грибов и дрожжей:
- 147. Приготовление раствора пенициллина: во флакон с пенициллином, содержащим 500000 ЕД, добавляют от 5 до 7 см3 стерильной дистиллированной воды, тщательно перемешивают до растворения. Содержимое флакона переносят в стерильную мерную колбу, вместимостью 100 см3, и доводят до метки стерильной дистиллированной водой при температуре от 35°С до 40°С. Получают раствор пенициллина, содержащий 5000 ЕД/ см3.
- 148. Приготовление раствора стрептомицина: 400 мг стрептомицина вносят в стерильную мерную колбу, вместимостью 100 см3, добавляют 10-20 см3 стерильной дистиллированной воды при температуре от 35°С до 40°С, перемешивают до растворения, затем доливают стерильной дистиллированной водой до метки. Массовая концентрация стрептомицина в растворе 4 г/ дм3.
- 149. Приготовление раствора неомицина: 500 мг неомицина вносят в стерильную мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 10 - 20 см3 стерильной дистиллированной воды при температуре от 35°С до 40°С, перемешивают до растворения, затем доливают стерильной дистиллированной водой до метки. Массовая концентрация неомицина в растворе 5 г/ дм3.
- 150. Приготовление раствора левомицетина (хлорамфеникола): 400 мг левомицетина вносят в стерильную мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 10-20 см3 стерильной дистиллированной воды при температуре от 35°С до 40°С, перемешивают до растворения, затем доливают стерильной дистиллированной водой до метки. Массовая концентрация левомицетина в растворе 4 г/дм3.
- 151. Среды и реактивы для определения бифидобактерий:
- 152. Среды для определения молочнокислых бактерий:
- Глава 18. Контроль питательных сред
Реквизиты документа
Полное наименование
О введении в действие МУК МЗ и СЗ ПМР 4.2.577-12 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов»
Издатель
Министерство здравоохранения и социальной защиты
Вид акта
Приказ
№ документа
№ 675
Редакция
Первоначальный документ
Дата документа
13.12.2012
Источник оф. опубликования
САЗ 13-7
Скачать
Доступно по тарифу
К карточке документа
Карточка документа
О введении в действие МУК МЗ и СЗ ПМР 4.2.577-12 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов»
Тип:
Приказ
Номер:
№ 675
Статус:
Опубликован
Редакция:
Первоначальный документ
Организация:
Министерство здравоохранения и социальной защиты
Дата:
13.12.2012